英文名称：CheKine™ Reactive Oxygen Species (ROS) Detection Assay Kit (Fluorometric)
货号：KTB1910
Abbkine
背景资料：
活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导和体内平衡中起重要作用。但是，在氧化应激相关状态下，ROS水平可以大大增加。 ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎症性疾病，以及神经退行性疾病和癌症的研究发挥重要的作用。ROS检测将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。
实验建议：
CheKine™活性氧（ROS）检测试剂盒提供了一种简单、灵敏、快速的ROS检测方法，其原理是利用荧光探针DCFH-DA 进行活性氧检测，DCFH-DA (二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯) 可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的酯酶水解，形成 DCFH，DCFH无荧光且不能通透细胞膜，其可以被细胞内的活性氧（ROS）氧化生成有荧光的DCF，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测或观察活细胞内DCF的荧光信号强度，即可以分析细胞活性氧的水平。
特点&优势：
• 利用超灵敏的荧光探针DCFH-DA 进行活性氧ROS检测
• 提供了详细的操作步骤
• 适合流式细胞仪和荧光显微镜检测活性氧水平
使用中注意事项：
• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
• 混合或复溶组分时，避免产生气泡。
• 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
• 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
• 阳性对照H2O2一般使用浓度为100 μM （推荐浓度50-200 μM，具体依细胞类型而定） 。通常刺激后30 min-4 h可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 min内观察不到活性氧的升高，可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果荧光信号过强，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
• 实验过程中，如果阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000-1:5000 稀释荧光探针DCFH-DA，使DCFH-DA的终浓度为 2-5 μM。探针装载的时间可在15-60 min 内适当进行调整，尽量缩短读片时的曝光时间，并且试验组、对照组曝光时间需保持一致。
• 活性氧阳性对照 (H2O2) 仅仅用于作为阳性对照的样品，并非所有试验组样品中都需加入活性氧阳性对照。
• 探针装载后，一定要洗净未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
• 尽量缩短探针装载后到检测所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。
文章来源：http://www.abbkine.cn/reactive-oxygen-species-ros-detection